默克限制性內(nèi)切酶是一種能夠識別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列,并在特定位置切割DNA鏈中的磷酸二酯鍵的一類酶,簡稱限制酶。不同的限制性內(nèi)切酶會識別不同的DNA序列,它可以在識別序列內(nèi)或距識別序列不遠(yuǎn)的位置處切割DNA,酶切之后會形成不同類型的產(chǎn)物。
默克限制性內(nèi)切酶常用于分子克隆實(shí)驗(yàn)中。但除了克隆,它還可以應(yīng)用于疫苗研發(fā)生產(chǎn)、基因測序、SNP鑒定、ddPCR等領(lǐng)域。限制性內(nèi)切酶的命名主要是根據(jù)細(xì)菌的屬名、種名、菌株或血清型、發(fā)現(xiàn)的順序而定。
在使用商品化的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行雙酶切時,一定要注意二者共用的Buffer,選錯了,試驗(yàn)就會面臨失敗。膠回收時,一定要使用適用于膠回收的核酸染料。
每一個限制性內(nèi)切酶就是一把手術(shù)刀,它們能夠識別特定的堿基序列準(zhǔn)確切割。在使用這些酶切割后,會產(chǎn)生平末端和粘性末端。根據(jù)自己的需要做一些設(shè)計(jì),一般來說,我們使用粘性末端連接多些。
在分子克隆試驗(yàn)中,我們常用II型的限制性內(nèi)切酶,比如BamHI、HindIII、EcoRI等等。利用它們做單酶切或雙酶切,構(gòu)建重組質(zhì)粒。一般酶切為37℃,3-4小時。酶切時間過短會造成切開的效率不高,過長會造成非特異性切割。有些酶具有典型的星號活性,即在一定條件下出現(xiàn)亂切。